Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis and bovine leukemia virus seroprevalence and associated risk factors in dairy herds in Minas Gerais state, Brazil / [Soroprevalência do Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis e vírus da leucemia bovina e fatores de risco associados em rebanhos leiteiros de Minas Gerais, Brasil]

Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis (MAP) e o vírus da leucemia bovina (BLV) são agentes que causam grandes perdas econômicas nos rebanhos. O objetivo deste estudo foi avaliar a situação epidemiológica da paratuberculose bovina (PTB) e leucose enzoótica bovina (EBL) em rebanhos leiteiros de Lagoa Formosa, Minas Gerais, Brasil. Foram coletadas 236 amostras de sangue de vacas, as quais foram submetidas aos testes ELISA e imunodifusão em gel de ágar para detecção de anticorpos contra MAP e BLV. A soroprevalência de anticorpos contra MAP e BVL foi de 20% para os rebanhos e 6% para os animais e de 85% para os rebanhos e 50,42% para os animais, respectivamente. A presença dessas enfermidades deve servir como um alerta para os produtores e veterinários, para que concentrem maior atenção na implementação de medidas higiênico-sanitárias, incorporando elementos de vigilância com base nos riscos identificados no estudo.(AU)

Serodiagnóstico de Paratuberculosis en bovinos del municipio de Sogamoso, Boyacá (Colombia) / Serodiagnosis of Paratuberculosis in cattle of the municipality of Sogamoso, Boyacá (Colombia) / Serodiagnóstico da paratuberculose no gado do municipio de Sogamoso, Boyacá (Colômbia)

RESUMEN La Paratuberculosis Bovina (PTB) o Enfermedad de Johne, es una infección del tracto gastrointestinal causada por Mycobacterium avium, subespecie paratuberculosis (Map), que se caracteriza por generar enteritis granulomatosa crónica y linfadenitis en rumiantes. La preocupación más relevante en relación con la importancia de la PTB es su posible vínculo con la Enfermedad de Crohn (EC) en humanos, sin embargo, esta asociación aún está bajo investigación. Se determinó la seroprevalencia de PTB en el municipio de Sogamoso (Boyacá), donde se recolectaron 604 muestras de sangre, cuyo suero fue procesado mediante la técnica de ELISA indirecta con el kit comercial PARACHEK® 2 KIT (Prionics, Suiza). La seroprevalencia fue de 10,9% (66/604), donde el grupo etario de 2 a 3 años y la raza Jersey fueron los de mayor seroprevalencia. Se encontró asociación estadística significativa (p≤0,05) entre la edad de los individuos evaluados y el suministro de concentrado. La seroprevalencia encontrada indica que se está produciendo una transmisión activa de la enfermedad y que las medidas de control disponibles no están siendo llevadas a cabo o no son lo suficientemente efectivas.

ABSTRACT Bovine Paratuberculosis (BPT), or Johne's Disease, is an infection of the gastrointestinal tract caused by Mycobacterium avium, subspecies paratuberculosis (Map), which is characterized by chronic granulomatous enteritis and lymphadenitis in ruminants. The most relevant concern regarding the importance of BPT is its possible link to Crohn's disease (CD) in humans, however this association is still under investigation. The seroprevalence of BPT was determined in the municipality of Sogamoso (Boyacá), where 604 blood samples were collected, their serum was processed by the indirect ELISA technique with the commercial PARACHEK® 2 KIT (Prionics, Switzerland), following the manufacturer's instructions. The seroprevalence was 10,9% (66/604), with the 2 to 3 years age group and the Jersey breed having the highest seroprevalence. A significant statistical association was found (p≤0,05) with the age of the individuals tested and the supply of concentrate. The seroprevalence found indicates that active transmission of the disease is taking place, and that the available control measures are not being carried out or are not effective enough.

RESUMO A Paratuberculose Bovina (PTB) ou Doença de Johne é uma infecção do trato gastrointestinal causada pela Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis (Map), caracterizada por gerar enterite granulomatosa crónica e linfadenite em ruminantes. A preocupação mais relevante em relação à importância do PTB é seu possível vínculo com a Doença de Crohn (DC) em seres humanos, no entanto, essa associação ainda está sob investigação. A soroprevalência do PTB foi determinada no município de Sogamoso (Boyacá), onde foram coletadas 604 amostras de sangue, cujo soro foi processado pela técnica ELISA indireta com o kit comercial PARACHEK® 2 KIT (Prionics, Suíça). A soroprevalência foi de 10,9% (66/604), onde a faixa etária de 2 a 3 anos e a raça Jersey foram as que apresentaram maior soroprevalência. Foi encontrada associação estatisticamente significante (p≤0,05) com a idade dos indivíduos avaliados e o suprimento de concentrado. A soroprevalência encontrada indica que a transmissão ativa da doença está ocorrendo e que as medidas de controle disponíveis não estão sendo realizadas ou não são eficazes o suficiente.

Evidence of in utero infection by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis using Multiple-Locus Variable-number tandem-repeat Analysis: first report in Argentina / Evidência de infecção intra-uterina por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis usando Multiple-Locus Variable-number tandem-repeat Analysis: primeiro relato na Argentina

A pregnant heifer with an advanced clinical stage of paratuberculosis was reported in a herd in Argentina. Thus, the animal was euthanized and samples of organs of the cow and its fetus was taken and cultured for bacteriology in specific medium. Tissues were analyzed by histopathology (hematoxylin-eosin and Ziehl-Neelsen staining). Histopathological analysis of the cow's samples revealed the presence of lesions consistent with paratuberculosis, and Ziehl-Neelsen staining revealed the presence of acid-fast bacilli, whereas the fetal tissues showed absence of lesions but the presence of acid-fast bacilli by Ziehl-Neelsen staining. After growing in specific medium, colonies in tissues from both cow and fetus were positive for IS900-PCR, confirming the presence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Finally, the isolates were typed by Multiple-Locus Variable-number tandem-repeat Analysis (MLVA), which confirmed the epidemiological link between them. This study is the first in Argentina to report the detection of MAP that shares an identical MLVA type in a pregnant cow and its fetus. The results of this study are consistent with previous reports and highlight the intra-uterine transmission of MAP as an important source of infection within herds.(AU)

Uma novilha prenha em estado clínico avançado de paratuberculose foi observada em um rebanho bovino na Argentina. O animal foi eutanasiado e foram colhidas amostras dos seus órgãos e dos órgãos feto as quais foram cultivadas para bacteriologia em meio específico. Os tecidos foram examinados por histopatologia (coloração de hematoxilina-eosina e Ziehl-Neelsen). Na histopatologia das amostras colhidas da novilha foram observadas lesões compatíveis com paratuberculose e a coloração de Ziehl-Neelsen revelou a presença de bacilos álcool-ácido resistentes, nos tecidos fetais não foram observadas lesões, porém a coloração de Ziehl-Neelsen revelou a presença de bacilos álcool-ácido resistentes. Após o crescimento em meio específico, as colônias foram positivas para o teste IS900-PCR nos tecidos de ambos, vaca e feto, confirmando a presença de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Por fim, os isolados foram tipados por Multiple-Locus Variable-number tandem-repeat Analysis, confirmando a relação epidemiológica entre eles. Este estudo relata a primeira detecção de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis na Argentina em que houve o compartilhamento de um tipo idêntico de MLVA em uma vaca prenhe e no seu feto. Os resultados deste estudo são consistentes com relatos anteriores e destacam a transmissão intra-uterina de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis como importante fonte de infecção nos rebanhos de bovinos.(AU)

Occurrence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in coalho cheese in the State of Pernambuco, Brazil / Ocorrência de Mycobaterium avium subsp. paratuberculosis em queijo coalho do Estado de Pernambuco, Brasil

Paratuberculosis is a chronic and incurable disease that affects ruminants and other domestic animals. It is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) that may also be involved in some human diseases such as Crohn's disease, type 1 diabetes, sarcoidosis, multiple sclerosis, and Hashimoto's thyroiditis. The objective of this study was to investigate the occurrence of MAP DNA in samples of artisanal coalho cheese purchased in the State of Pernambuco. Forty samples of coalho cheese submitted to the Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) technique were analyzed for the detection of the MAP region IS900. 11 (27.5%) were positive with a mean of 195.9 MAP colony forming unit (CFU) per gram of each sample, with a minimum of 30.3 CFU/g and a maximum of 324.2 CFU/g. Thus, this type of cheese that is one of the most consumed in this region of Brazil constitutes a source of human exposure to MAP. Further research in this area should be performed to evaluate the viability of the bacteria in this cheese type.(AU)

Paratuberculose é uma enfermidade crônica e incurável que acomete ruminantes e outras espécies de animais domésticos. É causada pelo Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) e ainda há a suspeita do seu envolvimento em enfermidades nos humanos como a doença de Crohn, diabetes tipo 1, sarcoidose, esclerose múltipla e tireoidite de Hashimoto. Objetivou-se com esta pesquisa investigar a ocorrência do DNA de MAP em amostras de queijo coalho artesanal adquiridas em estabelecimentos comerciais do Estado de Pernambuco. 40 amostras de queijo coalho artesanal foram submetidas a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) para detecção da região IS900 do MAP. 11 (27,5%) foram positivas com uma média de 195,9 unidades formadoras de colônia (UFC) de MAP por grama de queijo, com detecção mínima de 30,3UFC/g e máxima de 324,2UFC/g. Sendo assim, esse tipo de queijo que é um dos mais consumidos nesta região do Brasil constitui uma fonte de exposição humana ao MAP. Mais pesquisas nessa área devem ser realizadas para avaliar a viabilidade dessa bactéria no queijo coalho.(AU)

Spatial cluster analysis for bovine paratuberculosis in Paraiba State, Northeastern Brazil / Análise de aglomerados espaciais para paratuberculose bovina no Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

The aim of this survey was to identify spatial clustering of bovine paratuberculosis positive herds in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. The state was divided into three sampling groups: sampling stratum 1 (mesoregion of Sertão), sampling stratum 2 (mesoregion of Borborema), and sampling stratum 3 (mesoregions of Zona da Mata and Agreste). Ten animals were sampled in herds with up to 99 cows aged over 24 months; 15 animals were sampled in herds with 100 or more cows aged over 24 months; and all animals were sampled in those with up to 10 cows aged over 24 months. In total, 2504 cows aged ≥ 24 months were sampled from 480 herds. Indirect enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) test kits were used for Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) antibody detection. A herd was deemed positive for paratuberculosis if it included at least one positive animal in herds of up to 24 females, and two positive animals in herds with more than 24 females. Spatial clustering was assessed using the Cuzick-Edwards' k-nearest neighbor method and spatial scan statistics. Two significant clustering of positive herds were detected in Northern part of Borborema mesoregion, a border region with the State of Rio Grande do Norte, in which there is a large animal movement from different locations without knowing the sanitary condition of animals. As serological tests for MAP diagnosis are not widely available and are very expensive, as well as replacement or maintenance of livestock by animal purchasing is common in the region, it is concluded that prevention measures should be applied at herd level.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar agrupamentos espaciais de rebanhos positivos para paratuberculose bovina no Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. O estado foi dividido em três grupos amostrais: estrato amostral 1 (mesorregião do Sertão), estrato amostral 2 (mesorregião da Borborema), e estrato amostral 3 (mesorregiões da Zona da Mata e Agreste). Dez animais foram amostrados em rebanhos com até 99 vacas com idade maior ou igual a 24 meses; 15 animais foram amostrados em rebanhos com 100 ou mais vacas com idade maior ou igual a 24 meses; e todos os animais foram amostrados naqueles rebanhos com até 10 vacas. No total, foram amostradas 2504 vacas com idade ≥24 meses de 480 rebanhos. Para a detecção de anticorpos anti-Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) foram utilizados kits do teste imunoenzimático indireto (ELISA). Um rebanho foi considerado positivo para paratuberculose se apresentasse pelo menos um animal positivo em rebanhos de até 24 fêmeas, e dois animais positivos em rebanhos com mais de 24 fêmeas. Os agrupamentos espaciais foram avaliados com o uso da metodologia k-vizinhos mais próximos de Cuzick-Edwards e estatística espacial de varredura. Dois agrupamentos significativos de rebanhos positivos foram detectados na parte norte da mesorregião da Borborema, uma região de fronteira com o Estado do Rio Grande do Norte onde há intenso movimento de animais de diferentes locais sem o conhecimento do estado sanitário desses animais. Tendo em vista que os testes sorológicos para diagnóstico de MAP não são amplamente disponíveis e muito caros, bem como é comum na região a reposição e manutenção dos rebanhos por compra de animais, conclui-se que medidas de prevenção devem ser aplicadas em nível de rebanho.(AU)

Paratuberculosis: new histopathological findings in red deer (Cervus elaphus) and fallow deer (Dama dama) in Chile / Paratuberculosis: novos achados histopatológicos em Veado Vermelho (Cervus elaphus) e Gamo (Dama dama) no Chile

Paratuberculosis is a disease caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) that affects domestic and wild ruminants. The most common gross lesions are emaciation and corrugation and thickening of the mucosa of the small intestine. Mesenteric lymph nodes might be enlarged. For the present study, 14 red deer and 9 fallow deer from game reserves or venison farms were analyzed. The lesions found correspond to those found by other authors in other geographic locations, except for some differences in histopathological examinations. Among these differences, stands out that intestinal lesions were concentrated mostly in the ileum and granulomas were shown to be more frequent in this section of the intestine than in the corresponding lymph node. Furthermore, in multibacillary lesions the inflammatory infiltrate in the lymph nodes was mainly composed of macrophages. These differences may be due to individual variations of the animals, the stage of disease or a different strain of the pathogen. This study allowed to obtain basic information about the disease and to describe patterns of lesions found in red deer and fallow deer with prediagnosis of clinical paratuberculosis which were not described in the literature before.(AU)

Paratuberculosis é uma doença causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) que afecta ruminantes selvagens e domésticos. As lesões macroscópicas mais comuns são ondulação e espessamento da mucosa do intestino delgado. Os linfonodos mesentéricos podem aparecer com volume aumentado. Para este estudo, foram analisados 14 veados vermelhos e 9 veados gamo de reservas de caça e fazendas de carne. As lesões encontradas correspondem à encontrada por outros autores em outras localizações geográficas, com exceção de algumas diferenças no exame histopatológico. Entre essas diferenças, sobressai que as lesões intestinais se concentraram principalmente no íleo, os granulomas ocorreram com maior frequência nesta seção do intestino que no seu correspondente linfonodo. Além disso, nas lesões bacterianas, o infiltrado inflamatório linfonodos linfáticos era composta principalmente por macrófagos. Estas diferenças podem ser devidas a variações individuais dos animais, o estádio da doença ou de uma estirpe diferente do agente patogénico. Este estudo permitiu obter informação básica sobre a doença e descrever padrões de lesões encontradas em veados e em gamos com pré-diagnóstico, de paratuberculosis clínica nunca antes descritas na literatura.(AU)

Estudio epidemiológico de paratuberculosis bovina en hatos lecheros del sur de Nariño, Colombia / Epidemiological Study of Bovine Paratuberculosis in Dairy Herds in Southern Narino, Colombia / Estudo epidemiológico de paratuberculose bovina em gado leiteiro do sul de Nariño, na Colômbia

Introducción: la paratuberculosis (PTBC), también llamada enfermedad de Johne, es un trastorno gastrointestinal crónico de rumiantes domésticos y silvestres causado por Micobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP). Está distribuida mundialmente y genera un alto impacto en la ganadería, debido a que disminuye la producción, se pierde potencial genético por reemplazos tempranos de animales infectados y se incrementa la mortalidad. Objetivos: evaluar la presencia de anticuerpos anti-MAP en fincas lecheras del sur de Nariño y describir su distribución de acuerdo con características poblacionales. Métodos: se realizó un estudio transversal descriptivo en 958 vacas mayores de 2 años en 16 fincas lecheras. Para determinar la presencia de anticuerpos, se usó la prueba diagnóstica de Elisa indirecto (kit comercial Svanova®). La seropositividad fue asociada con las variables de raza, edad, ubicación, condición corporal, número de lactancias y estadio clínico mediante la prueba estadística de chi cuadrado. Resultados: se encontraron 15 fincas (94 %) con al menos un animal positivo y 77 vacas (8 %) con anticuerpos anti-MAP. Se estableció una asociación significativa (p < 0,05) con la condición corporal del animal. Conclusiones: en los principales municipios lecheros se encontraron vacas con anticuerpos anti-MAP y no se encontró relación entre edad, raza, ubicación y estatus clínico con la seroprevalencia-MAP, pero sí con la condición corporal.

Introduction: Paratuberculosis (PTB), or Johne's disease, is a chronic gastrointestinal disorder in domestic and wild ruminants caused by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP). It is distributed worldwide and generates a high impact on livestock, due to a decrease in production, loss of genetic potential by early replacement of infected animals, and increase in mortality. Objectives: To evaluate the presence of anti-MAP antibodies in dairy farms in southern Narino and to describe their distribution according to population characteristics. Methods: A descriptive cross-sectional study was performed on 958 cows over 2 years of age in 16 dairy farms. To determine the presence of antibodies, the indirect Elisa diagnostic test was used (Svanova® commercial kit). Seropositivity was associated with variables of race, age, location, body condition, lactation number, and clinical state by using the chi-square test statistic. Results: There were found 15 farms (94%) with at least one positive animal and 77 cows (8%) with anti-MAP antibodies. A significant association (p < 0.05) with the animal's body condition was established. Conclusions: Cows with anti-MAP antibodies were found in major dairy municipalities; it was found that MAP-seroprevalence is not connected to age, race, location and clinical status, but it is linked to body condition.

Introdução: a paratuberculose (PTBC), também conhecida como doença de Johne, é um transtorno gastrointestinal crônico de ruminantes domésticos e silvestres causado por Mi-cobacterium avium subespécieparatuberculose (MAP). Está distribuída mundialmente e gera um alto impacto na pecuária, devido a que diminui a produção, se perde potencial genético por substituições precoces de animais infectados e aumenta a mortalidade. Objetivos: avaliar a presença de anticorpos anti-MAP em fazendas de gado do sul de Nariño e descrever sua distribuição de acordo com características populacionais. Métodos: realizou-se um estudo transversal descritivo em 958 vacas maiores de 2 anos em 16 fazendas produtoras de gado. Para determinar a presença de anticorpos, se usou a prova diagnóstica de Elisa indireto (kit comercial Svanova®). A soro positividade foi associada com as variáveis de raça, idade, localização, condição corporal, número de lactancia e estádio clínico através da prova estatística de chi quadrado. Resultados: se encontraram 15 fazendas (94 %) com pelo menos um animal positivo e 77 vacas (8 %) com anticorpos anti-MAP. Estabeleceu-se uma associação significativa (p < 0,05) com a condição corporal do animal. Conclusões: nos principais municípios produtores de leite se encontraram vacas com anticorpos anti-MAP e não se encontrou relação entre idade, raça, localização e status clínico com a soro prevalência-MAP, mas sim com a condição corporal.

Teores de cobre, zinco e ferro no fígado de búfalos (Bubalus bubalis) com paratuberculose / Copper, zinc and iron content in the liver of buffaloes (Bubalus bubalis) with paratuberculosis

Com o objetivo de realizar um estudo dos teores de cobre (Cu), zinco (Zn) e ferro (Fe) em búfalas com paratuberculose (PTB) foram utilizadas 13 búfalas, das raças Murrah, Mediterrâneo e seus mestiços acima de três anos de idade, pertencentes a duas propriedades localizadas nos municípios de São Luiz e São Mateus, no Estado do Maranhão. Os animais foram selecionados de acordo com a presença de sinais clínicos sugestivos de paratuberculose, caracterizados por estado nutricional regular a ruim, diarreia crônica líquida a semi-líquida, desidratação, edema submandibular, anestro prolongado, mastites e verminose gastrintestinal. Foi realizada biópsia retal em todos os animais, para detecção de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) por meio da qPCR, e exames histopatológicos (HE e Ziehl-Neelsen)...

In order to study copper, zinc and iron concentration in the liver of buffaloes with paratuberculosis (PTB), 13 buffalo cows above three years of age of the Murrah and Mediterranean races or their crosses were used. They originated from two farms in the municipalities of São Luís and São Mateus, state of Maranhão, Brazil. The animals were selected according to clinical signs of paratuberculosis, as diarrhea, dehydration and submandibular edema. Rectal biopsies for detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) through PCR in real time (qPCR) and Ziehl-Neelsen (ZN) stain were performed on all animals...

Detection of mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in a cattle/pudu interface / Detecção de mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em uma interface gado/pudu

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) is the etiological agent of paratuberculosis. In Chile, information about Map isolation from both domestic ruminant and wildlife species has been accumulating, but it has to be extended to other species. The present study focuses specifically on one wild grazing species, the pudu (Pudu puda), one of the less known South American deer considered an endangered species that shares pastures with cattle in southern Chile, where the greatest part of the country's dairy cattle population is located. Convenient samples from 3 pudus were collected from one dairy farm where Map infection had previously been confirmed in cattle. All three pudus shed the bacterium in feces and the isolates are the same type of Map as described for cattle. This study represents the first case report of Map isolation in the pudu captured from the wild. It is also the first documented association between a Map-infected dairy herd and free-ranging wildlife species, such as pudu in the Los Ríos region, Chile. Since interspecies transmission of Map and other pathogens from livestock to pudu has already been demonstrated, the results from this study suggest that this free-ranging wildlife specie, inhabiting a dairy district in southern Chile, might represent another case of spillover host.

O agente etiológico da paratuberculose é o Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). No Chile, já foi gerada informação do isolamento do Map em ruminantes domésticos e em algumas espécies selvagens, porém essa informação deve ser expandida a outras espécies. O presente estudo está focado na espécie selvagem herbívora, o Pudu (Pudu puda), que é considerado um dos cervos menos conhecidos da América do Sul, e que está em extinção. Essa espécie compartilha as pastagens com o gado no sul do Chile, local do país onde está concentrada a maior parte do rebanho leiteiro. Foram obtidas amostras de 3 pudus de uma fazenda de gado leiteiro, onde previamente havia sido confirmada a infecção por Map em bovinos. Os três pudus eliminavam a bactéria nas fezes, e os isolados fecais foram do mesmo tipo do Map relatado para os bovinos. Este estudo representa o primeiro relato de caso de isolamento do Map em pudu em vida silvestre. Também é a primeira associação documentada entre um rebanho leiteiro infectado com Map e a infecção de uma espécie silvestre de vida livre, tal como o pudu na região de Los Ríos, no Chile. A transmissão interespécies do Map, do mesmo modo que de outros patógenos de ruminantes para o pudu, já foi demonstrada, assim os resultados deste estudo sugerem que essa espécie de vida extensiva, que habita a mesma região leiteira no sul do Chile, pode representar mais um caso de repercussão ao hospedeiro.

Diagnóstico de paratuberculose por biópsia retal em búfalos / Rectal biopsy for the diagnosis of paratuberculosis in buffaloes

Foram realizadas biópsias retais de 140 búfalos, machos e fêmeas, das raças Murrah e mestiços de Murrah com Mediterrâneo, com idade acima de três anos, em uma propriedade no município de São Mateus, Maranhão, Brasil. Adicionalmente foram realizadas necropsias de 11 búfalos, para realizar um estudo comparativo entre os achados das biópsias retais e de tecidos de íleo e linfonodo mesentérico. A propriedade apresentava histórico de animais com emagrecimento progressivo e diarreia não responsiva a antimicrobianos. Os búfalos apresentavam sinais clínicos caracterizados por diarreia, estado nutricional regular a ruim, desidratação e edema submandibular. Nas biópsias retais seis búfalos apresentaram lesões sugestivas da paratuberculose na Hematoxilina-Eosina (HE), sendo estas caracterizadas por inflamação granulomatosa multifocal moderada na lâmina própria com macrófagos epitelioides. Em quatro animais foram observadas adicionalmente células gigantes do tipo Langhans. Em 15 búfalos foi observado infiltrado linfocitário multifocal leve na lâmina própria. Pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), 4,3% (6/140) apresentaram bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) e na PCR em tempo real (qPCR), 5,71% (7/140) tiveram amplificação do material genético. Foram necropsiados 11 búfalos, à necropsia foram observados aumento de linfonodos mesentéricos com áreas esbranquiçadas na superfície de corte; intestino delgado e grosso com dobras transversais evidentes, mucosa espessada e irregular, de aspecto reticulado, placas de Peyer evidentes e conteúdo líquido e marrom. Ainda se viam áreas espessadas em torno da válvula ileocecal e vasos linfáticos evidentes. As lesões histológicas localizadas no intestino delgado e linfonodos mesentéricos de quatro búfalos foram compatíveis com lesões já descritas na literatura, e apresentaram BAAR e amplificação de material genético na qPCR. A concordância entre a biópsia retal e a análise dos tecidos de íleo e linfonodo mesentérico, segundo...

Paratuberculosis in a herd of buffaloes was studied in the municipality of São Mateus, Maranhão, Brazil. Rectal biopsies were performed in 140 male and female Murrah, Mediterranean and crossbreed buffaloes older than 3 years. Postmortem examination of 11 buffaloes was performed to compare the rectal biopsies with possible lesions in mesenteric nodes and the intestine. The history of the herd and clinical examination revealed progressive weight loss and non-responsive antimicrobial diarrhea, dehydration and submandibular edema. Rectal biopsies showed in six buffaloes microscopically suggestive lesions for paratuberculosis through hematoxilin-eosin staining (HE), characterized by moderate multifocal granulomatous enteritis with epithelioid cell infiltration. In four buffaloes Langhans giant cells were found. In 15 buffaloes lymphocytic infiltrate was observed in the lamina propria of the large intestine. Ziehl-Neelsen staining (ZN) revealed in 4.3% (6/140) acid-fast bacilli in the rectal mucosa. Real time PCR amplified to 5.71% (7/140) Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) DNA. 11 buffalos were submitted to postmortem examination, gross examination revealed augmented mesenteric nodes with whitish areas in the cut surface. The mucosa of the small intestine was irregular and thickened, with evident traverse folds and Peyer plates. The brownish intestinal content was fluid, the ileocecal valve area thickened and edematous with evident lymphatic vessels. Histological lesions in the mesenteric lymph node and small intestine four buffalo were compatible with those already described in the literature, and presented acid-fast bacilli by ZN staining and amplification of Map genetic material in qPCR. The concordance between the rectal biopsy and the postmortem samples was in agreement with the Kappa test (K=0.792) and was considered substantial or high. The rectal biopsy showed to be promising and can be used by practitioners, together with other...

Paratuberculose em bovinos de corte na região Sul do Rio Grande do Sul / Paratuberculosis in beef cattle in Southern Brazil

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos e clínico-patológicos de paratuberculose diagnosticada no sul do Rio Grande do Sul em uma propriedade de bovinos de corte. Dois bovinos criados extensivamente que apresentavam emagrecimento progressivo e diarreia crônica foram necropsiados. Os linfonodos mesentéricos estavam aumentados e edematosos. A mucosa do intestino estava espessada e enrugada com aspecto cerebroide principalmente na porção final do íleo, válvula íleo-cecal e ceco. Fragmentos dos órgãos foram fixados em formalina 10%, incluídos em parafina, cortados e corados pela técnica de hematoxilina e eosina (HE) e Ziehl-Neelsen (ZN). Fezes foram encaminhadas ao Departamento de Medicina Veterinária, Área de Medicina Veterinária Preventiva da Universidade Federal Rural de Pernambuco para o cultivo de Mycobacterium aviumsubsp.paratuberculosis em meio Lowenstein Jensen com micobactina e para realização da PCR. Histologicamente, havia enterite granulomatosa no jejuno, íleo, ceco e reto, afetando multifocalmente, também, o duodeno e o cólon. Havia, ainda, linfangite e adenite granulomatosa. Pela coloração de ZN foram observados numerosos bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) no interior de macrófagos, células gigantes de Langhans e nos linfonodos mesentéricos no jejuno, íleo ceco e reto. Não houve crescimento bacteriano nas amostras de fezes e cinco amostras amplificaram a sequência genética IS900 específica do Mycobacterium aviumsubesp. paratuberculosis. Pelo presente trabalho pode-se concluir que a paratuberculose apesar dos poucos relatos ocorre também em bovinos de corte criados extensivamente no sul do Rio Grande do Sul e pode ter uma prevalência maior do que se supõe na região. Alerta-se para a necessidade do diagnóstico e da tomada de medidas efetivas de controle para esta doença que, por muitos, ainda é considerada uma doença exótica no Brasil.

The epidemiological, clinical and pathological aspects of paratuberculosis diagnosed in southern Rio Grande do Sul in a beef cattle property are described. Two cattle raised extensively and that presented progressive weight loss and chronic diarrhea were necropsied. The mesenteric lymph nodes were enlarged and edematous. The intestinal mucosa was thickened and wrinkled with cerebroid aspect, especially in the final portion of the ileum, ileocecal valve and cecum. Fragments of the organs were fixed in 10% formalin, embedded in paraffin, sectioned and stained with hematoxylin and eosin (HE) and Ziehl-Neelsen (ZN). Feces samples were referred to Departamento de Medicina Veterinária, Área de Medicina Veterinária Preventiva da Universidade Federal Rural de Pernambuco, for the cultivation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis with Lõwenstein Jensen for mycobacterial and PCR analysis. Histologically, granulomatous enteritis was observed in the jejunum, ileum, cecum and rectum, and in multifocal areas the duodenum and colon. Lymphangitis and granulomatous adenitis was also observed. In ZN staining numerous resistant acid-fast bacilli (AFB) within macrophages, giant cells of Langhans and mesenteric lymph nodes in the jejunum, ileum cecum and rectum were observed. There was no bacterial growth in stool samples. Five samples amplified the gene sequence IS900 specific for Mycobacterium aviumsubsp. paratuberculosis. It can be concluded that paratuberculosis, despite the few reports, occurs in beef cattle raised extensively in southern Rio Grande do Sul, Paratuberculosis may have a higher prevalence in the region than it is assumed. There is need for diagnosis of this disease and to assume effective measures for its control, as for many it is still considered an exotic malady in Brazil.

Diagnóstico imuno-histopatológico da paratuberculose subclínica em bovinos no estado do Rio de Janeiro / Imuno-histopatologic diagnosis of subclinic bovine paratuberculosis in the state of Rio de Janeiro

O diagnóstico precoce e específico da paratuberculose ainda é um desafio. Isto pode estar associado à baixa sensibilidade dos testes laboratoriais e ou à variação da resposta imunológica frente à infecção por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Mundialmente, é uma enfermidade que causa importantes prejuízos econômicos, em especial, à bovinocultura leiteira, devido ao caráter crônico da infecção. No Brasil, a paratuberculose já foi descrita em diversas espécies de ruminantes domésticos e em vários estados, o que demonstra que a enfermidade está presente em território nacional e há a necessidade de elaboração de técnicas de diagnóstico para a confirmação da infecção. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os achados anátomo-histopatológicos e imuno-histoquímicos em intestino e linfonodos mesentéricos de bovinos assintomáticos, provenientes de rebanhos positivos para paratuberculose localizados no estado do Rio de Janeiro, Brasil. O estudo macroscópico revelou alterações inespecíficas tais como áreas avermelhadas na mucosa do intestino, aumento do volume das placas de Peyer e dos linfonodos mesentéricos, além disso, observou-se que vasos linfáticos mesentéricos estavam dilatados e esbranquiçados. Do total de 52 vacas leiteiras avaliadas, a histopatologia revelou infiltração granulomatosa, por vezes com formação de células gigantes multinucleadas, em mucosa e ou submucosa de jejuno, íleo e em linfonodos mesentéricos, principalmente na região cortical, em 32 animais. Estes bovinos foram submetidos à coloração de Ziehl-Neelsen cujo teste não demonstrou reação positiva, no entanto, quando analisados pelo teste imunohistoquímico para Mycobacterium spp. observou-se imunorreação em 6 animais. Desta forma, a histopatologia e imunohistoquímica pode ser uma importante ferramenta para diagnóstico da paratuberculose subclínica.

The early and specific diagnosis of paratuberculosis remains a challenge due to the low sensitivity of the currently available laboratory tests and also because of variations in the immune response towards infection with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Globally this disease causes significant economic losses, primarily in dairy cattle, owing to the chronic nature of the infection. Paratuberculosis has been described in a number of Brazilian states and from a diversity of domestic ruminant species clearly demonstrating that the disease is present in the country and highlighting the requirement for the development of diagnostic techniques for confirmation of infection and for epidemiological analyses. The aim of this study was to characterize the anatomo-histopathological and immunohistochemical findings in the bowel and mesenteric lymph nodes of assymptomatic cattle, derived from paratuberculosis positive herds located in state of Rio de Janeiro, Brazil. Macroscopic examination during necropsy revealed nonspecific changes including reddening of the gut mucosa, increased volumes for the Peyer's patches and mesenteric lymph nodes and in some case dilation and whitening of the mesenteric lymphatic vessel. Histopathology revealed granulomatous infiltration, occasionally with the formation of giant cells in the jejunal and ileal mucosa or sub-mucosa, and/or in the cortical region of the mesenteric lymph nodes, in 32 of the 52 cattle examined. Tissue sections from these animals were subjected to Ziehl-Neelsen staining, but the presence of acid-fast bacilli was not observed. Subsequent analysis, employing genus specific immunohistochemisty for Mycobacterium, revealed areas of immunoreactivity in sections prepared from a total of six animals. The results of this investigation highlighted the value of histopathology and particularly immunohistochemistry as tools for the diagnosis of subclinical paratuberculosis.

Paratuberculose em ruminantes no Brasil / Paratuberculosis in ruminants in Brasil: a review

A paratuberculose ou doença de Johne é uma enterite granulomatosa causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) e comumente afeta ruminantes domésticos, no entanto, pode infectar várias espécies de mamíferos. Está presente nos cinco continentes e é considerada endêmica em algumas regiões pela Organização Internacional de Epizootias (OIE). Pertence à lista de enfermidades notificáveis, que compreende as doenças transmissíveis de importância sócio-econômica e/ou em saúde-pública, cujo controle é necessário para o comércio internacional de animais e alimentos de origem animal. A importância da doença de Johne não se restringe somente aos prejuízos econômicos causados à indústria animal, mas também na possível participação do Map na íleocolite granulomatosa que afeta seres humanos, conhecida como doença de Crohn. No Brasil, a paratuberculose já foi descrita em diversas espécies de ruminantes e em vários estados. Embora os relatos naturais da enfermidade sejam pontuais, acredita-se na possibilidade da transmissão interespecífica e na disseminação do agente através da compra e venda de animais infectados. O objetivo deste artigo foi reunir as informações disponíveis referentes aos aspectos epidemiológicos, clínico-patológicos e laboratoriais da paratuberculose em bovinos, bubalinos, caprinos e ovinos no Brasil, e salientar a necessidade de implementação de medidas de controle sanitário da enfermidade no país, o que possibilitaria a melhoria da qualidade e valorização dos produtos de origem animal no mercado internacional.

Paratuberculosis also known as Johne's disease, is a granulomatous enteritis caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), an acid-fast bacillus that preferentially resides within host intestinal macrophages. The condition is most commonly seen in domestic ruminants, however MAP can also infect other mammalian species. Paratuberculosis shows a global distribution and is considered endemic in some regions. The World Organization for Animal Health (OIE, Office International des Epizooties), have classified paratuberculosis as a notificable disease; considered to be of socio-economic and/or public-health importance, the control of which is necessary for the international trade of animal and animal products. The importance of paratuberculosis is related primarily to economic losses in the animal industry and also because of a potential role for this bacterium in the pathogenesis of Crohn´s disease, a debilitating condition affecting the digestive tract of humans. In Brazil, paratuberculosis has been reported in a variety of ruminant species and shows a broad geographic distribution. The reported incidence of natural cases in Brazil has been limited, but it is believed that interespecific transmission of MAP and dissemination of the agent is driven by the commercialization of infected animals. The main objective of this paper was to collate the published epidemiological, clinic-pathological and diagnostic information in relation to paratuberculosis in cattle, buffaloes, goats and sheep in Brazil. Moreover, it served as a platform to emphasize the requirement to implement sanitary policies for control of MAP in the county, which may serve to improve the quality and value of animal products on international markets.

Frequência de anticorpos para paratuberculose em bovinos no semiarido paraíbano / Frequency of antibodies against paratuberculosis in cattle in the state of Paraiba

A paratuberculose é uma doença importante em bovinos na Paraíba, tendo sido diagnosticados, pelo Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande, cinco focos da doença nos últimos quatro anos. Neste trabalho objetivou-se realizar um estudo sorológico em rebanhos com e sem histórico da doença para estimar a frequência da infecção por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) em diferentes regiões do semiárido Paraibano. Utilizando o teste de ELISA pesquisou-se a frequência de animais soropositivos contra Map em duas fazendas onde tinha sido diagnosticada a doença, encontrando-se 72,22% (13/18) e 68,75% (11/16), respectivamente de bovinos sorologicamente positivos. Amostras de soro de 486 bovinos de 36 fazendas sem histórico da doença de diferentes regiões da Paraíba (sertão, cariri e agreste), também foram examinados por ELISA. A frequência de animais soropositivos foi de 10,08±1,07% (49/486). Foram encontrados animais positivos em 21 (58.33%) das 36 fazendas estudadas. Os resultados sugerem que o agente da paratuberculose está disseminado em bovinos na Paraíba e que são necessárias medidas de controle para diminuir a frequência de casos clínicos e subclínicos da doença.

Paratuberculosis is an important disease of cattle in the state of Paraíba, northeastern Brazil. In the Veterinary Hospital of the Federal University of Campina Grande, five outbreaks of paratuberculosis were diagnosed in the last four years. The objective of this paper is to report the frequency of antibodies against paratuberculosis in different regions of the state of Paraíba, in farms with previous diagnosis of the disease and in farms without diagnosis. The prevalence of antibodies against paratuberculosis, examined by ELISA, in two farms with cases of the disease, was of 72.22% (13/18) and 68.75% (11/16), respectively. Serum samples from 486 healthy cattle from 36 farms without paratuberculosis diagnosis, from three different regions of Paraíba (sertão, cariri, and agreste), were also examined by ELISA. The frequency of antibodies was 10.08±1,07% (49/486). Antibodies against paratuberculosis were found in 21 (58.33%) out of 36 farms examined. These results suggest that paratuberculosis is an important disease of cattle in the state of Paraíba and that control measures to decrease the prevalence of the disease are necessary.

Paratuberculose em caprinos e ovinos no Estado da Paraíba / Paratuberculosis in goats and sheep in the state of Paraiba

Mediante o teste de ELISA foi determinada a presença de anticorpos para Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (map) em amostras de soro de 734 caprinos e 392 ovinos, sem sinais clìnicos aparentes, provenientes de 14 Municipios do semiárido Paraibano. Em caprinos, a frequência média de anticorpos de 44,86± 22,91% e em ovinos foi de 52,96±31,49. Das 46 propriedades estudadas, 44 (95,65%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Nos 14 municípios avaliados houve presença de animais sorologicamente positivos, variando de 20% a 70%. Em caprinos sem raça definida e mestiços a frequência (48,56%) foi significativamente inferior (P<0,0270) que a de caprinos de raças puras (57,24%). Em ovinos com escore de 1 a 3 a frequência (59,39%) foi significativamente maior (P=0,0034) que a frequência em ovinos com escore superior a 3 (42,42%). Não houve diferença significativa nas frequências em caprinos e ovinos de diferentes idades, em caprinos com diferente escore corporal e em ovinos de diferentes raças. No exame microbiológico, em cultivos em meio HEYM com micobactina J, foram observadas colônias semelhantes às do Map em 9 (6,58%) das 180 amostras de fezes, sendo uma de caprinos e 8 de ovinos. Na coloração de Ziehl Nieelsen as bactérias apresentavam características morfo-tintorias de Map. Os resultados obtidos indicam alta frequência de caprinos e ovinos infectados com Map no semiárido da Paraíba, tornando-se necessário desenvolver pesquisas sobre a epidemiologia e forma de controle da doença nas condições de criação da região.

Antibodies to paratuberculosis were determined by ELISA in serum samples of 734 goats and 392 sheep, without clinical signs, from 14 municipalities of the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In goats, average frequency of antibodies was 44.86±22.91% and in sheep was 52.96±31.49%. All municipalities had affected animals with a frequency varying from 20% to 70%. In goats of unknown breed and crossbreds the prevalence (48.56%) was significantly lower (P=0.0270) than in pure breed goats (57.24%). In sheep with body scores of 1 to 3, the frequency (59.39%) was significantly higher (P=0.0034) than in sheep with body score from 3 to 5 (42.42%). No significant differences were observed in goats and sheep of different ages, in goats with different body score, and in sheep of different breeds. In the microbiologic examination, after 16 weeks of incubation in HEYM medium with mycobactin J, colonies similar to those of do Mycobacterium avium subsp. paratuber culosis were observed in cultures of 9 (6.58%) out of 180 fecal samples, being one from goats and 8 from sheep. In the Ziehl Nieelsen the bacteria had morphologic and staining characteristics similar to M. avium subsp. paratuberculosis. These results suggest that paratuberculosis is endemic with high prevalence in the semiarid region of Paraíba. It is necessary to develop research on the epidemiology and control measures of the disease in the conditions of this region. Also the risk for human beings should be determined, mainly in relation with milking goats.

First report of paratuberculose in Southern Pudu deer (Artyodactila: Cervidae) / Primeiro caso de paratuberculose em veado pudu-do-sul (Artiodactila: Cervidae)

Descreve-se o primeiro caso de paratuberculose em veado pudu-do-sul (Pudu pudu). O animal foi encontrado na cidade de Concepción, centro sul do Chile, em péssimas condições e com sinais claros de diarréia. Internamente apresentava séria atrofia de gordura no coração, lesões histológicas nos pulmões, fígado, baço e rins, e injúrias intestinais. Diferentes amostras foram preparadas com Ziehl-Neelsen, e os linfonodos mesentéricos presentes no íleo foram fortemente positivos para a bactéria resistente ao ácido.

Hepatite granulomatosa em bovino causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis / Granulomatous hepatitis in cattle caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Samples from intestines, liver, and lymph nodes were collected from a dairy steer with clinical suspicion of paratuberculosis. The samples were processed for histologic examination with hematoxylin-eosin and Zihel-Neelsen (ZN) staining for the detection of acid-fast bacilli (AFB), and submitted to immunohistochemistry (IHC). Macroscopic changes were observed in the small intestines, with thickening and corrugation of the mucosa. The main microscopic changes were found in small intestines, lymph vessels in the mesentery, and mesenteric lymph nodes characterized by enteritis, lymphangiectasia, and lymphadenitis. Liver presented with granulomatous hepatitis, an uncommon histopathological feature for paratuberculosis. The clinical features associated with positive culture of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and detection of AFB by ZN and IHC in the cytoplasm of macrophages (epithelioid) in the intestinal mucosa and submucosa, lymph nodes, and liver were important to confirm the diagnosis of paratuberculosis.

Aspectos clínico-patológicos e controle da paratuberculose em rebanho bovino leiteiro / Clinic-pathological aspects and control of paratuberculosis in a dairy cattle herd

A paratuberculose ou doença de Johne é uma enterite granulomatosa causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínico-patológicos e laboratoriais da paratuberculose em rebanho bovino leiteiro no município de Rio Claro, região Sul do Estado do Rio de Janeiro. No período de 2006 a 2009, oito vacas adultas da raça Girolanda apresentaram diarreia crônico-intermitente e perda progressiva de peso. À necropsia, observaram-se linfonodos mesentéricos aumentados de volume e úmidos ao corte, vasos linfáticos subserosos das alças intestinais proeminentes, serosa do intestino com aspecto anelado e cerebroide e a mucosa espessada, pregueada e com aspecto microgranular. À microscopia havia, desde o duodeno até o reto, inflamação granulomatosa difusa, marcada dilatação dos vasos linfáticos no ápice das vilosidades, linfangiectasia e linfangite granulomatosa na submucosa, muscular e serosa. A inflamação granulomatosa também foi vista nos linfonodos mesentéricos. A coloração de Ziehl-Neelsen revelou variável quantidade de bacilos álcool-ácido resistentes no interior de macrófagos, de células gigantes de Langhans e livres na mucosa e submucosa dos intestinos delgado e grosso e em linfonodos mesentéricos. Em alguns animais, a lâmina própria da mucosa, principalmente do jejuno e íleo exibia acentuada hipertrofia. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis foi isolado em cultivo bacteriano de Herrold com micobactina, a partir de amostras de fezes, de raspado de mucosa intestinal e de leite e identificado pela técnica de PCR IS900. Através da avaliação sorológica semestral, foram analisadas 298 vacas do mesmo rebanho a partir de três anos de idade, observou-se cerca de 40 por cento de animais reagentes ao teste ELISA indireto no período estudado. O diagnóstico da paratuberculose foi baseado nos dados clínico-patológicos, na sorologia, no isolamento e identificação do agente através de cultivo bacteriano e PCR IS900. Após implementação de medidas de controle, tais como eliminação de animais doentes, abate seletivo dos animais soropositivos, separação dos bezerros ao nascer e utilização de banco de colostro, observou-se, nos três anos de estudo, diminuição da ocorrência de casos clínicos no rebanho, de seis casos por ano para cerca de um caso por ano.

Paratuberculosis (Johne's disease) is a granulomatous enteritis of ruminants caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Epidemiology, clinic-pathological and laboratorial aspects of paratuberculosis in a dairy cattle herd are described. The disease was diagnosed from 2006 to 2009 in eight cows that presented chronic-intermittent diarrhea and chronic weight loss, in the Rio Claro municipality, Rio de Janeiro. At necropsy, the subserosal lymphatic vessels were proeminent and dilated, mesenteric nodes were enlarged and intestinal mucosa was corrugated, thickened and of microgranular aspect. From duodenum to the rectum, histopathology revealed severe and diffuse granulomatous inflammation of the lamina propria and submucosa, broadened and distorted villi, dilatation of the lymphatic vessels in their apex, lymphangioectasia and granulomatous lymphangitis in the submucosa. Ziehl-Neelsen stain showed variable amounts of acid-fast bacilli in macrophages, in Langhans giant cells and freely in the mucosa and submucosa of the small intestine, colon and lymphnodes. In some cows, the lamina propria presented severe hypertrophy, mainly in the jejunum and ileum. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis was isolated through bacterial cultivation of samples taken from feces, intestinal mucosa and milk, and identified through IS900 PCR. From 298 cows older than three years, the percentage of reactive animals was 40 percent by indirect ELISA test. The diagnosis of paratuberculosis was based on clinic-epidemiological data, serology, bacterial isolation in Herrold egg yolk medium with micobactin and on IS900 PCR. After the adoption of control measures, as slaughter of cows with clinical signs, selective slaughter of seropositive cows, removal of the calf from the dam at birth, and use of the colostrum bank, we observed a reduction from six clinical cases to only one case per year, in the last three years of the study.

Identifi cation of Mycobacterium avium subspeciesparatuberculosis by PCR techniques and establishment ofcontrol programs for bovine paratuberculosis in dairy herds / Identificación de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis mediante pruebas dePCR y definición de programa de control de la paratuberculosis bovina en hatos lecheros / Identificação de Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis por PCR edefinição do programa de controle da paratuberculose em rebanhos bovinos leiteiros

The aim of this study was to establish the protocol of conventional and real time PCR for amplificationof Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) genome from bovine fecal samples, as a wayto define strategies for establishing a prevention and control program in a dairy herd at the Universidadde Antioquia (Medellín, Colombia). Fecal samples were individually taken of clinical healthy cows orcows with diarrhea bred in a herd enzootic for Johne’s disease, were processed them for culture in liquidMiddlebrook 7H9 media supplemented with mycobactin under two different protocols: with or withoutinhibitors. Fecal samples from clinically healthy cows were used as negative control. Conventional andreal time PCR were performed with MAP DNA obtained of fecal or cultured samples. The MAP- specificIS900 segment was amplified by using the respective forward and reverse primers. DNA isolated from areference MAP strain was used as positive control of PCR. Data were analyzed by descriptive statisticsand simple regression analysis between PCR and culture results were performed. All samples culturedin media with or without mycobactin gave a positive result compatible with MAP growth. However, only13,3% of samples were positive by real time PCR. There was no relationship neither between PCR and culture results, nor between clinical condition of the cow and MAP positivity. These results support theneed combine culture of feces with PCR diagnosis for identification of MAP-excreting cows in a dairyherd. Finally, a strategy of prevention and control of bovine paratuberculosis is proposed for this enzooticherd and for dairy herds in Colombia.

El objetivo de este trabajo fue establecer un sistema de detección y amplificación del Mycobacteriumavium paratuberculosis (MAP) a partir de muestras de materia fecal bovina, mediante el uso de la técnicade PCR en tiempo real, como estrategia de apoyo para el establecimiento de un programa de prevencióndetección y control de la paratuberculosis bovina en el hato lechero de la Universidad de Antioquia. Muestrasde materia fecal fueron tomadas de bovinos provenientes de un hato enzoótico para la enfermedad de Johne,fueron cultivadas en medio de cultivo líquido Middlebrook 7H9 suplementado con micobactina, bajo dosprotocolos de aislamiento: con o sin inhibidores. Como control negativo fue utilizada muestras de materiafecal de bovinos clínicamente sanos. Adicionalmente, con el DNA de las muestras aisladas en cultivo yde las muestras de materia fecal, fueron hechas pruebas de PCR convencional y en tiempo real, para laamplificación del elemento de inserción IS900 del MAP, mediante el uso de cebadores específicos para esteelemento. Como control positivo se utilizó DNA de MAP de una cepa de referencia. Los resultados fueronevaluados mediante estadística descriptiva y la comparación entre el resultado del cultivo y de la pruebade PCR fue evaluado mediante regresión simple. Los resultados del cultivo bacteriológico, mostraron untotal de 15 muestras con crecimiento compatible con MAP, el cual fue verificado por prueba de PCR enel 13.3% de los casos. No hubo correlación entre el resultado de cultivo y la prueba de PCR ni entre elestado clínico y la positividad al MAP. Los resultados confirman la necesidad de combinar el diagnósticomolecular con el cultivo bacteriológico para identificar las vacas positivas en un hato. Finalmente, unaestrategia de prevención y control de la enfermedad aplicable a este hato enzoótico y a los hatos lecherosen Colombia es discutida.

O objetivo deste estudo foi estabelecer um sistema de detecção e amplificação do Mycobacterium aviumparatuberculosis (MAP) a partir de amostras fecais bovinas, utilizando a técnica de PCR em tempo real,como uma estratégia para apoiar o estabelecimento de um programa rastreio para a prevenção e controlede la paratuberculosis bovina no rebanho leiteiro da Universidade de Antioquia. Foram colhidas amostrasde fezes de gado bovino a partir de uma fazenda enzoótica para a doença de Johne, e foram cultivadasem meio de cultura líquida Middlebrook 7H9 suplementado com micobactina, sob dois protocolos deisolamento: com ou sem inibidores. Foram utilizadas como controle negativo amostras fecais de bovinossaudáveis. Além disso, as amostras de DNA isoladas e cultivadas a partir de amostras fecais foramrealizadas testes de PCR convencional e em tempo real, para amplificação elemento de inserção IS900 noMAP. Foi utilizado como controle positivo do teste DNA de uma estirpe de referencia. Os resultados foramavaliados por estatística descritiva e as comparações entre os resultados de cultura e teste PCR foramavaliadas por regressão simple. Os resultados de cultura bacteriológica mostraram 100% de crescimentoem amostras com MAP, que foi verificada por PCR em 13,3% dos casos. Não houve correlação entre oresultado do cultivo e teste PCR ou entre a clínica e a positividade para MAP. Os resultados confirmam anecessidade de combinar o diagnóstico molecular com cultura bacteriológica para identificação positivade vacas em um rebanho. Finalmente, uma estratégia de prevenção e controle da doença aplicável nesterebanho enzoótico e os rebanhos leiteiros e na Colômbia é discutida.

Ocorrência de paratuberculose em búfalos (Bubalus bubalis) em Pernambuco / Occurrence of paratuberculosis in buffaloes (Bubalus bubalis) in Pernambuco

A paratuberculose (doença de Johne) é uma das doenças de maior importância econômica para ruminantes em vários países e pode representar uma ameaça ao desenvolvimento da pecuária brasileira. É uma doença infecto-contagiosa que provoca enterocolite granulomatosa crônica, incurável e de difícil controle, cujo agente é o Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Descreve-se a ocorrência de paratuberculose em um rebanho de búfalos no Estado de Pernambuco, Brasil. Não foi encontrado registro, na literatura, da ocorrência de paratuberculose em búfalos no país. De 100 búfalos, cinco mostravam sinais clínicos característicos da doença. À necropsia de dois animais as lesões estavam restritas ao intestino delgado com evidente espessamento da mucosa, aumento de linfonodos mesentéricos e vasos linfáticos proeminentes e dilatados. À microscopia, observaram-se na mucosa do intestino, infiltrado inflamatório granulomatoso com numerosos macrófagos epitelióides e células gigantes de Langhans, além de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) visualizados através da coloração de Ziehl-Neelsen (ZN). Nos linfonodos mesentéricos, havia espessamento da cápsula e marcada inflamação granulomatosa. O exame direto pela técnica de ZN para pesquisa do bacilo em esfregaços de fezes, raspado de mucosa intestinal e imprint de linfonodos mesentéricos resultou positivo. A PCR IS900 específico de linfonodo mesentérico e mucosa intestinal revelou amplificação de um fragmento de aproximadamente 110pb, confirmada pela comparação com outras sequências de M. avium subsp. paratuberculosis disponíveis no GenBank.

Paratuberculosis (PTB) is a disease of great economical importance for ruminant in several countries and represents a threat to the development of Brazilian livestock. The contagious disease caused by chronic PTB leads to incurable granulomatous enterocolitis of difficult control. PTB is caused by the Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). No record on the occurrence of paratuberculosis in buffaloes in Brazil could be found. Five of 100 buffaloes in a herd in Pernambuco-Brazil showed clinical signs characteristic of PTB. At necropsy, of two animals the lesions were restricted to the small intestine with thickening and corrugation of the mucosa, increase of mesenteric lymph nodes and prominent lymph vessels. Histopathology revealed granulomatous inflammation infiltrated with numerous epithelioid macrophages, Langhans type giant cells, and clusters of Ziehl-Neelsen (ZN) positive organisms within the intestinal mucosa. In the mesenteric lymph nodes there was thickening of the capsule and marked granulomatous inflammation. Smears of feces and scrapping smears were prepared from intestinal mucosa and cut surface of mesenteric lymph nodes and, stained by the Ziehl-Neelsen method for research of acid fast bacilli, with positive results. Lymph nodes and intestinal mucosa revealed at IS900 specific polymerase chain reaction amplification of a fragment of about 110pb, confirmed by the comparison with other sequences of M. avium subsp. paratuberculosis available in GenBank.